एल-5-एमटीएचएफ-सीए की सुरक्षा का मूल्यांकन जीनोटॉक्सिसिटी, सबक्रोनिक और प्रीनेटल डेवलपमेंटल टॉक्सिसिटी के परीक्षण द्वारा किया गया था। इन विट्रो परीक्षण में L-5-MTHF-Ca उत्परिवर्तजन नहीं था और अन्य गुणसूत्र घटनाओं को प्रेरित नहीं करता था। 

एल-5-एमटीएचएफ-सीएन तो टेराटोजेनिक है और न ही भ्रूण-विषैला। इन विट्रो और इन विवो अध्ययनों के परिणामों के आधार पर, खाद्य पदार्थों में एक घटक के रूप में एल-5-एमटीएचएफ-सीए के सुरक्षित उपयोग का समर्थन किया जाता है। उप-क्रोनिक विषाक्तता अध्ययन में कोई प्रतिकूल प्रभाव का स्तर उच्चतम खुराक नहीं देखा गया, यानी नर और मादा चूहों के लिए 400 मिलीग्राम/किग्रा बीडब्ल्यू/दिन।

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